第134章 黎明前的测序 (4/7)
底层是红色的酚氯仿相,中间是一层薄薄的白色蛋白交界面,最上层是无色的水相。
所有的病毒RNA,都溶解在这最上层的无色水相中。
江河深吸了一口气,换了一把P200的移液枪。
这一步是整个提取过程中最关键的一步。
如果吸到了中间的蛋白层或者底层的有机相,整个样本就废了。
他将手肘支撑在台面上,按下移液枪的按钮。
枪尖精准悬停在无色水相的中央,缓缓吸取了400微升的液体,移入一个全新的无酶离心管中。
全程,江河的手没有一丝颤抖。
外科医生的定力,在这一刻展现得淋漓尽致。
陆晓林在旁边看得头皮发麻。
——哪怕是浸淫实验室多年的老研究员,悬空吸取水相时也难免会有细微的晃动,但江河的手就像是被焊死了一样,稳得可怕。
「加入等体积的异丙醇,陈浩,递冰盒。」
「加入等体积的异丙醇,陈浩,递冰盒。」
样本在冰上静置了10分钟後,再次放入冷冻离心机。
转,10分钟。
再次取出时,管底出现了一点点半透明胶状沉淀。
「RNA沉淀出来了。」程溪瑶隔着护目镜,眼睛亮了起来。
江河:「弃上清,加1毫升75%的冰乙醇洗涤沉淀。」
轻轻悬浮沉淀後,第三次离心。
7500转,5分钟。
最後,用移液枪极其小心地吸走所有的乙醇液体,将离心管敞口放置在超净台的通风处。
「风乾5分钟,不能干透,否则很难溶解。」
五分钟後,江河加入20微升RNase-free的水,轻轻吹打。
「去测浓度。」江河把样本递给陆晓林。
陆晓林拿着样本走到NanoDrop分光光度计前,取了一微升滴在检测基座上,放下悬臂。
电脑屏幕上立刻跳出一条曲线。
「浓度120 ng\/μl,A260\/280比值。」陆晓林声音迅速,「师弟,提取极其完美!纯度极高,没有蛋白和苯酚污染!」
陈浩几个人长长地松了一口气,互相对视了一眼。
做到了!
江河毫不犹豫,道:「立刻进行逆转录,RNA极易降解,必须马上把它变成稳定的A。」
「引物用什麽?」陆晓林问。
「用随机六聚体引物(Random Hexamers)做全转录本的逆转录。」
江河走到冰箱前,拿出逆转录试剂盒:「不需要特异性引物,我们在PCR阶段再用甲流通用的HA(血凝素)和NA(神经氨酸酶)保守区引物去钓出目标片段。」
看着手里的试剂,江河眼神微动。
其实,如果这真的是一种完全未知的全新病毒,今晚的这几个小时根本连门槛都摸不到。
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